準確測定有機化合物的分子結構，對從分子水平去認識物質(zhì)世界，推動(dòng)近代有機化學(xué)的發(fā)展是十分重要的。采用現代儀器分析方法，可以快速、準確地測定有機化合物的分子結構。在有機化學(xué)中應用最廣泛的測定分子結構的方法是四大光譜法：紫外光譜、紅外光譜、核磁共振和質(zhì)譜。紫外和可見(jiàn)光譜（ultraviolet and visible spectrum）簡(jiǎn)寫(xiě)為UV。

紫外光譜的發(fā)展史：1852年，比爾(Beer)參考了布給爾(Bouguer)1729年和朗伯(Lambert)在1760年所發(fā)表的文章，提出了分光光度的基本定律，即液層厚度相等時(shí)，顏色的強度與呈色溶液的濃度成比例，從而奠定了分光光度法的理論基礎，這就是著(zhù)名的朗伯比爾定律。1854年，杜包斯克(Duboscq)和奈斯勒(Nessler)等人將此理論應用于定量分析化學(xué)領(lǐng)域，并且設計了第一臺比色計。到1918年，美國國家標準局制成了第一臺紫外可見(jiàn)分光光度計。此后，紫外可見(jiàn)分光光度計經(jīng)不斷改進(jìn)，又出現自動(dòng)記錄、自動(dòng)打印、數字顯示、微機控制等各種類(lèi)型的儀器，使光度法的靈敏度和準確度也不斷 提高，其應用范圍也不斷擴大。紫外可見(jiàn)分光光度法從問(wèn)世以來(lái)，在應用方面有了很大的發(fā)展，尤其是在相關(guān)學(xué)科發(fā)展的基礎上，促使分光光度計儀器的不斷創(chuàng )新，功能更加齊全，使得光度法的應用更拓寬了范圍。

紫外分光光度計工作原理：1、物質(zhì)的吸收光譜本質(zhì)上就是物質(zhì)中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長(cháng)的光能量，相應地發(fā)生了分子振動(dòng)能級躍遷和電子能級躍遷的結果。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會(huì )相同。因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線(xiàn)，可根據吸收光譜上的某些特征波長(cháng)處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎。

2、又因為許多物質(zhì)在紫外-可見(jiàn)光區有特征吸收峰，所以可用紫外分光光度法對這些物質(zhì)分別進(jìn)行測定（定量分析和定性分析）。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。

3、朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)是光吸收的基本定律，俗稱(chēng)光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據和基礎。當入射光波長(cháng)一定時(shí)，溶液的吸光度A是吸光物質(zhì)的濃度C及吸收介質(zhì)厚度l(吸收光程)的函數。

4、首先確定實(shí)驗條件，并在此條件下測得標準物質(zhì)的吸收峰以及其對應波長(cháng)值（同時(shí)可獲得該物質(zhì)的最大吸收波長(cháng)）；再在選定的波長(cháng)范圍內（或最大波長(cháng)值處），分別以（不同濃度）標準溶液的吸光度和溶液濃度為橫、縱坐標繪出化合物溶液的標準曲線(xiàn)得到其所對應的數學(xué)方程；接著(zhù)在相同實(shí)驗條件下配制待測溶液，測得待測溶液的吸光度，最后用已獲得的標準曲線(xiàn)方程求出待測溶液中所需測定的化合物的含量。

5、具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結構的有機化合物，根據在特定吸收波長(cháng)處所測得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。

紫外分光光度計難點(diǎn)——校正方法：紫外分光光度計的校正方法：分光光度法的最重要的一個(gè)物理化學(xué)量是吸光度。為了獲得準確的研究結果，準確測得樣品溶液的吸光度是非常重要的。一般，分析結果的不可靠性與偶然誤差和系統誤差有關(guān)。偶然誤差影響測量的精密度，可通過(guò)足夠數量測量的統計處理來(lái)減少;系統誤差影響測量結果的準確度，可在大體相同實(shí)驗條件下，用比較一種物質(zhì)的準確測量結果，使系統誤差統一起來(lái)。而分光光度計的系統誤差(波長(cháng)校正、分光光度計的慢散光、放大器的線(xiàn)性響應、暗電流和比色皿的光程)和操作誤差(溫度改變、儀器讀數、操作者的改變、使用物質(zhì)的純度、稱(chēng)量和濃度、pH)對測量吸光度的影響是可以檢查和校正的。關(guān)于操作誤差，多數情況下，通過(guò)嚴格按操作程序測量、儀器調零、準確稱(chēng)量等來(lái)控制或減少這種誤差的產(chǎn)生。關(guān)于儀器的系統誤差，可通過(guò)對分光光度計的定期校正來(lái)克服，若所需準確度很高的測量，則必須天天校正。

紫外分光光度計難點(diǎn)——讀數不穩定：1、先不放比色皿，看儀器是否漂移。如果不漂移，說(shuō)明儀器正常。

2、放入空白溶液比色皿調零，讀數漂移到一定數值后，取出比色皿看一下，內壁是否有極細小的氣泡。

一般紫外光度計讀數不穩定的根本原因應該有兩類(lèi)：一類(lèi)是能量降低，信噪比下降，這個(gè)可能性比較大；另一類(lèi)是信號接收和處理故障。

1、能量降低

（1） 比色皿

如果是在400nm以下波長(cháng)測量，需使用石英比色皿，假如使用普通玻璃比色皿會(huì )吸收大部分的紫外能量。還有比色皿一般有光面和毛面之分，毛面是手捏的，光面是對正光路的。

（2）樣品架：

檢查樣品架是否在正確的槽位上，光是否全部照在比色皿上。方法是把波長(cháng)設定到550nm左右，這時(shí)是比較明亮的黃綠色光，在樣品室內用個(gè)小紙片擋下就能看到光斑。這個(gè)方法也能檢測可見(jiàn)區的光源是否正常，濾光盤(pán)及波長(cháng)驅動(dòng)是否正常。

（3）空白樣品

樣品室不放任何東西對空氣調零，看是否穩定。如果穩定的話(huà)，應該是空白樣品本身吸光度太高了。方法是先對空氣調零，然后把空白樣品放入光路中看讀數。如果讀數很大，例如接近3A，則不可用。

（4）光源

先確認分析波長(cháng)值，一般紫外可見(jiàn)有2個(gè)光源，紫外區用氘燈，可見(jiàn)區用鎢燈，切換點(diǎn)一般在340nm-400nm。鎢燈光較為明亮刺眼，氘燈光偏青紫色。如果儀器后面有透光窗口可以直接看，如果沒(méi)有的話(huà)，需要打開(kāi)外殼，打開(kāi)燈室罩。光源都是用壽命的，能量變弱或干脆不亮了，要換燈。也有比較小的可能是光源供電電路故障，例如電源老化后可能導致無(wú)法正常點(diǎn)亮氘燈。

（5）光路

看光路是否偏了，可以把波長(cháng)設定到550nm左右，觀(guān)察樣品室內有無(wú)黃綠色光線(xiàn)，光斑能否正確照在接收器窗口上。確認燈室內光源光斑是否正確照在單色器入狹縫上，確認光路中有無(wú)雜物擋住。確認單色器內反射鏡、透鏡、光柵、濾光片等是否發(fā)霉或積滿(mǎn)灰塵，這個(gè)需要廠(chǎng)家才能處理。

（6）驅動(dòng)電路故障

例如濾光盤(pán)驅動(dòng)異常，導致濾光片用錯或者干脆光路被遮擋。一般廠(chǎng)家或專(zhuān)業(yè)人員處理。

2、信號接收和處理故障

接收器（例如光電池或者光電倍增管）、放大電路、AD轉換電路等都有可能。這類(lèi)問(wèn)題一般由廠(chǎng)家或專(zhuān)業(yè)人員處理。